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fivephoton TMPER-200說(shuō)明書(shū)
跨膜蛋白提取試劑 （質(zhì)膜蛋白分離） 零件 tmper-200。100 毫升體積。 適用于300個(gè)10cm的匯合細(xì)胞培養(yǎng)皿。根據(jù)培養(yǎng)皿的表面積，體積可擴(kuò)展到其他尺寸的培養(yǎng)皿。
跨膜蛋白提取 FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取試劑 (tmPER-200 TM ) 是一種細(xì)胞裂解蛋白提取緩沖液，含有專(zhuān)有成分，有助于提取和分離高分子量跨膜蛋白，否則由于聚集趨勢(shì)、脂筏結(jié)合或其他不溶性問(wèn)題，這些蛋白在標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞裂解緩沖液中很難分離。Transmembrane Protein Extraction Reagent 旨在提取具有 4 個(gè)或更多跨膜結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，同時(shí)也能有效分離不太復(fù)雜的跨膜蛋白質(zhì)。FIVEphoton Biochemicals 跨膜蛋白提取試劑的適用性示例包括在蛋白質(zhì)印跡下游應(yīng)用中提高 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、離子通道、離子交換器和 GPCR 的分辨率。 跨膜蛋白提取試劑：通用方案 研究人員首先采用協(xié)議手冊(cè)中描述的技術(shù)來(lái)限制內(nèi)吞作用和溶酶體靶向，否則可能導(dǎo)致多膜跨越蛋白的細(xì)胞質(zhì)域的蛋白水解切割。在第二步中，加入添加了蛋白酶抑制劑的跨膜蛋白提取試劑以從細(xì)胞培養(yǎng)皿中去除細(xì)胞并溶解細(xì)胞膜。膜溶解后，使用短暫離心從含有提取的跨膜蛋白的上清液中去除細(xì)胞碎片。在 SDS-PAGE 凝膠中拆分之前，將上清液加入 Laemmli 樣品緩沖液中，加熱但未煮沸。對(duì)于蛋白質(zhì)印跡，轉(zhuǎn)移發(fā)生在添加了 SDS 和少量甲醇的轉(zhuǎn)移緩沖液中。
圖例。野生型 (WT) 和 deltaF508 CFTR，一種 12 TM 結(jié)構(gòu)域蛋白，由 MDCK 細(xì)胞中的腺病毒感染表達(dá)，并用跨膜蛋白提取試劑提取。WT CFTR 揭示了一個(gè) 170 kD 的上帶，反映了復(fù)雜的糖基化，以及一個(gè)核心糖基化帶。相比之下，deltaF508 CFTR 的運(yùn)輸受損，保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，因此僅與核心糖基化帶合成。運(yùn)輸障礙是囊性纖維化的根本原因。 圖標(biāo)圖像： CFTR 在 HEK293 細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)并用跨膜蛋白提取試劑提取。捕獲核心和復(fù)雜糖基化的野生型變體的蛋白質(zhì)印跡。
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