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bmgrp BI-20032說明書

更新時(shí)間：2020-12-15 點(diǎn)擊次數(shù)：1860

bmgrp BI-20032說明書

oLAB (Anti-Oxidized LDL Autoantibodies) ELISA | BI-20032

oLAB（抗氧化的LDL自身抗體）ELISA | BI-20032

抗氧化的LDL自身抗體ELISA（oLAB）亮點(diǎn)：

樣本量小
總孵育時(shí)間僅2小時(shí)15分鐘
包含2個(gè)控件
CE標(biāo)記–在歐盟用于IVD

分析特征

方法
間接ELISA，HRP / TMB，12×8孔可分離試紙
樣品類型
血清
樣品量
50微升/孔
測(cè)定時(shí)間
1.5小時(shí)/ 30分鐘/ 15分鐘
靈敏度
48毫升/毫升
標(biāo)準(zhǔn)范圍
0 – 1,200 mU / ml
特異性
抗氧化的LDL自身抗體
中間運(yùn)行（n = 5）：≤8％CV
批量分析（n = 8）：≤4％CV
采用
CE標(biāo)記–在歐盟用于IVD

產(chǎn)品詳情

抗氧化的LDL自身抗體產(chǎn)品概述

抗氧化LDL自身抗體（oLAB）免疫分析是2小時(shí)15分鐘的96孔間接ELISA，用于定量測(cè)定血清中的抗氧化LDL自身抗體。

抗氧化的LDL自身抗體的測(cè)定原理

抗oxldl抗體ELISA試劑盒是一種間接酶免疫法，用于定量測(cè)定血清樣品中的抗氧化LDL自身抗體。

一步，將預(yù)先稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品/樣品移入微量滴定條的孔中，并預(yù)先用氧化的LDL抗原包被。標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品中存在的抗氧化LDL自身抗體與孔中預(yù)包被的抗原結(jié)合。在去除所有非特異性未結(jié)合物質(zhì)的洗滌步驟之后，將綴合物（單克隆抗人IgG-HRP）移入孔中，并與抗氧化的LDL自身抗體發(fā)生反應(yīng)。
在另一個(gè)洗滌步驟之后，將底物（TMB，四甲基聯(lián)苯胺）吸移到孔中。底物的酶催化顏色變化與樣品中存在的抗氧化LDL自身抗體的數(shù)量成正比。使用標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀可以檢測(cè)到這種顏色變化。直接從劑量響應(yīng)曲線確定樣品中抗氧化的LDL自身抗體的濃度。

抗氧化的LDL自身抗體典型標(biāo)準(zhǔn)曲線

下圖顯示了oxldl分析試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線。

oLAB ELISA典型標(biāo)準(zhǔn)曲線

抗氧化的LDL自身抗體ELISA試劑盒組件

內(nèi)容	描述	數(shù)量
盤子	條帶固定器中氧化的LDL預(yù)涂層微量滴定條，包裝在帶干燥劑的鋁袋中	12 x 8測(cè)試
膨脹	未經(jīng)涂層的微量滴定板，用于樣品預(yù)處理	12 x 8孔
洗車場(chǎng)	濃縮洗滌緩沖液20倍，自然蓋	1 x 50毫升
性病	標(biāo)準(zhǔn)1-6（0; 0.62; 1.25; 2.5; 5; 10μg/ ml），抗氧化LDL IgG抗體，白色帽蓋，可以使用	6 x 500微升
CTRL鍵	對(duì)照品A和B，黃色瓶蓋，準(zhǔn)備使用，濃度請(qǐng)參見標(biāo)簽	2 x 500微升
ASYBUF	分析緩沖液，紅色蓋帽，準(zhǔn)備使用	1 x 60毫升
康杰	結(jié)合物（單克隆抗人IgG-HRP），琥珀色帽，可以使用	1 x 13毫升
潛艇	基材（TMB解決方案），藍(lán)蓋，可以使用	1 x 13毫升
停	停止溶液，蓋上白帽，準(zhǔn)備使用	1 x 7毫升

儲(chǔ)存說明： oLAB ELISA試劑盒中的所有試劑在4°C（2-8°C）的溫度下均穩(wěn)定，直到每種試劑標(biāo)簽上標(biāo)明的有效期為止。

樣品收集與儲(chǔ)存

血清適合用于此oxldl分析試劑盒。我們建議對(duì)所有樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件旨在作為一般準(zhǔn)則。

血清

在標(biāo)準(zhǔn)化的血清分離管（SST）中收集靜脈血樣。讓樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘。根據(jù)試管制造商的使用說明離心分離。立即測(cè)定采集的樣品，或等分試樣并保存在-25°C或更低的溫度下。脂血或溶血的樣品可能會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。樣品解凍不要超過四次。

試劑準(zhǔn)備

洗滌緩沖液

1。	使WASHBUF濃縮液達(dá)到室溫。緩沖液濃縮物中的晶體將在室溫（18-26°C）下溶解。
2。	將WASHBUF濃縮液按1:20的比例稀釋，例如50 ml WASHBUF + 950 ml蒸餾水或去離子水。進(jìn)行測(cè)定時(shí)僅使用稀釋的WASHBUF。

稀釋的WASHBUF在4°C（2-8°C）下可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。

樣品制備

將樣品置于室溫并輕輕混合樣品，以確保樣品均勻。我們建議對(duì)所有樣品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。

抗氧化的LDL自身抗體測(cè)定方案

在開始測(cè)定之前，請(qǐng)閱讀整個(gè)方案。

1。	使樣品和試劑達(dá)到室溫（18-24°C）。
2。	在協(xié)議表上標(biāo)記STD / CTRL / SAMPLE（標(biāo)準(zhǔn)/對(duì)照/樣品）的位置。

在預(yù)稀釋板中

注意：所有STD / CTRL / SAMPLE（標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品/樣品）都必須以1:55的終稀釋度使用（預(yù)稀釋度1：5 +稀釋度1:11）。將隨附的DILPLATE（未涂布的微量滴定板）用于1：5的預(yù)稀釋步驟。

1。	移液200 µl ASYBUF（測(cè)定緩沖液）到未包被的微量滴定板的適當(dāng)孔中。。
2。	將50 µl STD / CTRL / SAMPLE（標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品/樣品）加入各自的孔中，混合均勻（= 1：5稀釋）。

注意：預(yù)稀釋的物質(zhì)必須在15分鐘內(nèi)用于測(cè)定。

在預(yù)涂板中

1。	從鋁袋中取出微量滴定條。將未使用的干燥劑帶在4°C的鋁袋中存放。膠條在標(biāo)簽上標(biāo)明的有效期限之前都是穩(wěn)定的。
2。	移取200 µl ASYBUF（測(cè)定緩沖液，紅色蓋帽）到每個(gè)孔中，包括空白。
3。	將20 µl 1：5的STD / CTRL / SAMPLE稀釋液分別加入各孔中。輕輕旋轉(zhuǎn)。注意：必須在15分鐘內(nèi)完成將預(yù)稀釋的STD / CTRL / SAMPLE轉(zhuǎn)移到預(yù)涂的微量滴定條中。使用多通道移液器。
4。	蓋緊板并在37°C下孵育1.5小時(shí)。
5，	用300 µl稀釋的WASHBUF（洗滌緩沖液）吸取并洗滌孔4次。后一次洗滌后，用一塊毛巾強(qiáng)力拍打板將剩余的WASHBUF取出。
6。	除空白外，向每個(gè)孔中加入100 µl CONJ（結(jié)合物，琥珀色帽）。
7。	蓋緊并在室溫（18-24°C）下孵育30分鐘。
8。	抽吸并用300 µl稀釋的WASHBUF洗滌孔4次。后一次洗滌后，用一塊紙巾強(qiáng)力拍打板，以清除殘留的WASHBUF。
9。	在每個(gè)孔中加入100 µl SUB（底物，藍(lán)色蓋）。
10。	在黑暗中于室溫下孵育15分鐘。
11。	在每個(gè)孔中加入50 µl STOP（終止溶液，白色蓋）。輕輕旋轉(zhuǎn)。
12	如果可用，立即在參考630 nm的450 nm處測(cè)量吸光度。

計(jì)算結(jié)果

從所有其他值中減去為空白獲得的吸光度讀數(shù)。使用能夠生成四參數(shù)對(duì)數(shù)（4-PL）擬合的可商購(gòu)軟件從標(biāo)準(zhǔn)值構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。或者，將標(biāo)樣在x軸上的濃度相對(duì)于每種標(biāo)樣在y軸上的平均吸光度作圖，并通過圖中的點(diǎn)繪制佳擬合曲線。除4-PL以外的曲線擬合算法尚未得到驗(yàn)證，用戶需要對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品濃度。光密度（OD）值超過標(biāo)準(zhǔn)范圍高點(diǎn)的樣品可以進(jìn)一步稀釋。計(jì)算樣品的終濃度時(shí)，必須考慮使用1：5以外的樣品稀釋液。

套件隨附的質(zhì)量控制協(xié)議顯示了每個(gè)套件終版本QC的結(jié)果。客戶獲得的光密度數(shù)據(jù)可能會(huì)受到各種影響，包括在整個(gè)保質(zhì)期內(nèi)正常降低信號(hào)強(qiáng)度。但是，只要濃度高的標(biāo)準(zhǔn)品的光密度為1.00或更高，并且CTRL的值在目標(biāo)范圍內(nèi)（參見標(biāo)簽），這就不會(huì)影響結(jié)果的有效性

抗氧化的LDL自身抗體

氧化的低密度脂蛋白（oxLDL）被認(rèn)為在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起關(guān)鍵作用。oxLDL在巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中的積累會(huì)導(dǎo)致泡沫細(xì)胞形成，這是疾病的一步。可以將抗氧化修飾的LDL的自身抗體用作能始終反映體內(nèi)發(fā)生的氧化過程的參數(shù)。實(shí)際上，已經(jīng)在患有冠狀動(dòng)脈疾病的患者的血流中檢測(cè)到針對(duì)oxLDL的自身抗體水平升高。此外，近的研究表明，針對(duì)oxLDL的自身抗體與頸動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展之間存在相關(guān)性。在諸如先兆子癇和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等各種疾病中，oLAB的血清濃度也有所增加。
oLAB的臨床應(yīng)用概述已經(jīng)發(fā)布。

心血管疾病
- 動(dòng)脈粥樣硬化（Bornaun等人，2017; de Freitas等人，2018; Pawlak等人，2012; Shoji等人，2003; Stanek等人，2018）
- 冠狀動(dòng)脈疾病（Faviou等，2005; Miller等，2003）
- 心肌梗塞（Huang et al。，2013）
- 中風(fēng)（Ciancarelli et al。，2012）
其他
- 急性敗血癥（Al-Banna和Lehmann，2013年）
- 先兆子癇（Arifin et al。，2017）

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